實驗目的:此次實驗對象是小鼠肺組織樣品,經過單細胞懸液制備儀的實驗制備后可用流式細胞檢測樣品活細胞的得率。細胞樣品的制備在流式細胞檢測過程中十分重要,單細胞懸液制備儀的應用可獲取高活性、完整性好的單細胞懸液,可大幅度提高樣品實驗效率和成功率。
實驗設備:單細胞懸液制備儀JX-CKSM-WK系列
小鼠肺組織樣品前處理的實驗操作過程:
1.手動將運行模塊(樣品槽)移至加熱模塊一側,打開電源開關,點擊熱板模塊加熱和運行模塊加熱,靜待5分鐘左右使模塊溫度上升至所需溫度,一般為37.5°C。
2.將要研磨的小鼠肺組織樣品剪成1mm以下的小塊放入專用配套樣品試管中,加入消化液,消化液要盡量加滿,避免試管中有氣泡。
3.將要研磨的小鼠肺組織樣品剪成1mm以下的小塊放入專用配套樣品試管中,加入消化液,消化液要盡量加滿,避免試管中有氣泡。
4.將試管從預熱模塊中取出放入運行模塊中
5.合上儀器蓋,選定程序,點擊啟動,運行半小時左右,程序停止后一會兒開蓋觀察試管中樣品的消化情況,若還有大塊組織存在,可以自定義程序選擇8000rpm,1min啟動。
6.待消化液運行完后取出樣品,上下振蕩樣品管十下,觀察渾濁度和顏色,過細胞篩網后加入終止液即是單細胞懸液。
實驗注意事項:
1.消化酶和終止液均需要在冷凍環(huán)境下保存。
2.消化酶解凍時需要在常溫條件下解凍,不可以放入水浴或者其它加熱儀器中解凍,溫度升高對酶的活性會有很大的影響。
4.單次樣品量不要超過研磨管內珠子的大小。
5.程序運行結束后不要立馬取出樣品,可以稍等一分鐘后再取出。
小鼠肺組織樣品的前處理實驗研磨效果圖:
實驗結果:對樣品懸液的測序,細胞活率為96.8%,滿足樣品的實驗需求。
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